Аутоиммунитет и рак. Динамический анализ изменен
Мой сайт


Пятница, 09.12.2016, 04:52


Приветствую Вас Гость | RSS


Главная | Регистрация | Вход
Меню сайта

Мини-чат
200

Наш опрос
Оцените мой сайт
Всего ответов: 3

Статистика

Онлайн всего: 1
Гостей: 1
Пользователей: 0

Форма входа

Главная » 2013 » Июнь » 15 » Аутоиммунитет и рак. Динамический анализ изменен
04:29
 

Аутоиммунитет и рак. Динамический анализ изменен

Аутоиммунитет и рак. Динамический анализ изменений в составах аутоантител как инструмент мониторинга за эффективностью лечения предраковых состояний на модели дисплазии шейки матки

18 Окт

А.Б.Полетаев1)2), М.М.Дамиров3), И.Н.Тютерева3),С.В.Скурыдин1),А.А.Полетаева1),Ш.Х.Ганцев4),А.С.Юсупов4)

МИЦ «Иммункулус», Москва1); НИИ нормальной физиологии им. П.К.Анохина РАМН, Москва, Россия2);Кафедра акушерства и гинекологии Российской медицинской академии последипломного образования, Москва3); Кафедра хирургии и онкологии Башкирского государственного медицинского университета, Уфа4)

Полетаев Александр Борисович,
главный научный сотрудник НИИ нормальной физиологии
им. П.К.Анохина РАМН,
научный руководитель МИЦ «Иммункулус»,
доктор медицинских наук, профессор

В данной работе проанализированы изменения в относительном содержании некоторых естественных ауто-АТ у женщин с дисплазиями шейки матки 1, 2 и 3 степени, до лечения и после эффективного лечения указанной патологии.


Ключевые слова:
аутоиммунитет, ауто-АТ, дисплазия шейки матки

“…We have met with a paradox.

Now we have some hope of making progress…”

Niels Bohr

Введение. Естественные аутоантитела в норме и патологии.

Последние двадцать лет развития клинической иммунологии характеризовалось появлением ряда, на первый взгляд парадоксальных идей, противоречащим устоявшимся взглядам. В качестве примера можно отметить загадку аутоантител (а-АТ). Выявление а-АТ в сыворотке человека ранее рассматривали исключительно как патологическое явление, связанное с развитием аутоиммунных болезней, однако в настоящее время надежно установлено, что развитие любых хронических заболеваний (отнюдь не только аутоиммунных) обязательно сопровождается ростом продукции определенных видов а-АТ. Это подтверждается исследованиями сывороток крови пациентов с атеросклеротическими сосудистыми поражениями, инсультами, осложнениями течения беременности, разными формами рака [Полетаев, 2010; Backes et al., 2011 Poletaev et al., 2007] и другими. Более того, установлено, что естественные а-АТ класса IgG и IgM, направленные против самых разных антигенов собственного организма, постоянно присутствуют в сыворотке крови любого здорового человека на протяжении всей индивидуальной жизни [Lacroix-Desmazes et al., 1998]. Причем, если у подавляющего большинства здоровых лиц сывороточные уровни а-АТ определенной антигенной специфичности оказываются весьма близкими, то при развитии тех или иных хронических заболеваний, как правило, наблюдаются существенные отклонения в содержании определенных видов а-АТ, весьма специфичных для каждой болезни [Lacroix-Desmazes et al., 1998; Poletaev, Churilov, 2010]. Последнее объясняется «правилом И.Е.Ковалева», гласящего, что уровень продукции определенных а-АТ регулируется уровнем соответствующих антигенов по принципу обратных связей [Ковалев, Полевая, 1985]. Понятно, что уровни отмирания-регенерации клеток печени, легких, почек, кишечника и т.п., так же как и интенсивность экспрессии тех или иных органоспецифических антигенов примерно равны у всех здоровых лиц, что и обуславливает приблизительно равные уровни продукции «гепатотропных», «пульмотропных» и т.п. а-АТ у всех здоровых лиц. В тоже время, развитие любого хронического заболевания, включая онкологические, прямо обуславливается нарушениями интенсивности процессов апоптоза-некроптоза-некроза некоторых типов специализированных клеток и/или нарушениями экспрессии определенных антигенов, специфичных для тех или иных клеточных популяций. Что, в свою очередь, закономерно (обратные связи!) отражается в изменениях продукции соответствующих а-АТ, весьма специфичных для самых разных болезней. Иными словами иммунная система, посредством как бы «видит» патологический очаг, начиная с самых ранних стадий развития болезни, и реагирует на него, изменяя уровни продукции а-АТ к антигенам затронутых тканевых (органных) структур. Подобные аутоиммунные реакции физиологически оправданны, имеют компенсаторный (саногенный) характер и направлены на поддержание общего гомеостаза за счет клиренса пораженного органа от избытка продуктов распада [Полетаев, 2010]. Понятно, что иммунные маркеры любой хронической патологии, пригодные для выявления болезни на доклинических этапах ее развития, равно как и для мониторинга за динамикой развития болезни, например, в ходе ее лечения, представляется весьма заманчивым использовать в практической медицине.

В данной работе мы анализировали изменения в относительном содержании некоторых естественных ауто-АТ у женщин с дисплазиями шейки матки 1, 2 и 3 степени, до лечения и после эффективного лечения указанной патологии.

Материалы и методы

Пациенты. В работе анализировали особенности сывороточных паттернов ауто-АТ, типичных для сывороток крови клинически здоровых лиц (n = 60; средний возраст 24 года), женщин, с гистологически подтвержденными дисплазиями шейки матки (ДШМ; степень Д1-Д3; n = 21; средний возраст 34 года) до лечения и спустя 6 месяцев после лечения при клиническом и гистологическом подтверждении отсутствия рецедивных изменений. Пробы сыворотки крови клинически здоровых лиц были предоставлены Республиканским онкологическим диспансером Башкортостана, Уфа и Кафедрой акушерства и гинекологии РМАПО, Москва. Пробы сывороток от женщин групп Д1…Д3 были получены от пациенток, находившихся под наблюдением и на лечении в гинекологическом отделении ГКБ № 72 г. Москвы. При дисплазии стадии Д1 проводилась радиохирургическая биопсия, выскабливание цервикального канала, местная противовоспалительная, антибактериальная; при стадиях Д2/Д3 – хирургическая ампутация шейки матки. До лечения и спустя 6 мес. после лечения проводили обязательное гистологическое исследование, а также ИФА-исследование на сывороточное содержание а-АТ, направленных к синтетическим фрагментам ряда белков, экспрессия которых заметно меняется при малигнизации. В силу небольших объемов выборок, женщины с ДШМ были разделены не на три, а на две группы (Д1/Д2 и Д2/Д3, соответственно), при этом, группу Д2 с относительно малыми изменениями объединяли с группой Д1, а Д2 с более выраженными изменениями – с группой Д3.

Иммунохимические исследования. Сыворотки крови, полученные от наблюдавшихся пациенток с ДШМ до- и после лечения, были однократно заморожены и хранились при температуре -20оС не более 3 месяцев. С помощью стандартизованных ИФА тест-систем в образцах сывороток крови определяли содержание а-АТ к главным иммуногенным регионам следующих белков: R-Jag_ADD (мембранный белок, участвующий в регуляции клеточной пролиферации и дифференцировки), Sc-Jagged_YCF (мембранный белок, участвующий в регуляции клеточной пролиферации и дифференцировки), NRC4_WEF (Nuclear Receptor Coactivator 4, регулятор транскрипции), E3SPL_SSQ (E3 SUMO-protein ligase, участвует в убиквитин-зависимой посттрансляционной модификации белков), LAGE-1(2)_LEY (экспрессируется в повышенных количествах на клетках опухолей разных типов; принадлежит к раково-тестикулярным антигенам), MAGE-A3_LEY (предположительно участвует в механизмах опухолевой прогрессии), NY-ESO/LAGE_SGL (экспрессируется в повышенных количествах на клетках опухолей разных типов; принадлежит к раково-тестикулярным антигенам), TRAG-3_PPF (экспрессируется в повышенных количествах резистентными к химиотерапии клетках опухолей разных типов; принадлежит к раково-тестикулярным антигенам), HER-2(1)_TPG (рецептор тирозинкиназы erbB-2, компонент нейрегулин-рецепторного комплекса; дефекты белка ассоциируются с онкогенезом), Cycl_B_YSC1 (субъединица ДНК-зависимой РНК-полимеразы), S100_KHK (Са-связывающий белок – модулятор множества клеточных функций; в том числе, участвует в регуляции апоптоза), Coll_PST-12 (коллаген, главный компонент межклеточного матрикса). Сведения о структуре и функциях соответствующих белков можно найти в Интернет-ресурсе http://www.uniprot.org/uniprot/. Синтез пептидных фрагментов отобранных белков, был выполнен компанией “Peptide 2.0 Inc” (Chantilly, США). Таковыми фрагментами стали В-эпитопы главных иммуногенных сайтов исследуемых белковых антигенов, картирование и моделирование которых проводилось, согласно общепринятым протоколам иммуноинформатики. Иммуноферментный анализ сывороточной иммунореактивности с отобранными антигенами проводили по общепринятым схемам на 96-луночных планшетах Maxisorb (Nunk, Дания) как описано ранее [Полетаев и др., 2003]. Среднюю индивидуальную иммунореактивность сывороток и нормализованное содержание а-АТ к каждому из антигенов (сывороточные паттерны а-АТ) рассчитывали, используя компьютерную программу, разработанную МИЦ «Иммункулус». Оценивали индивидуальные особенности «профилей» (паттернов аутореактивности пациента), т.е. отклонения относительного содержания тех или иных исследовавшихся а-АТ от индивидуальной средней иммунореактивности [Meroni et al., 2007; Полетаев и др., 2003]. После чего рассчитывали среднюю групповую иммунореактивность по отношению из антигенов до лечения дисплазии и спустя 6 месяцев после лечения.

Статистический анализ. Полученные результаты анализировали с помощью методов непараметрической статистики (критерий Манна-Уитни, Вилкоксона, Краскела-Уоллиса) с использованием пакета программ Statistica 8.

Результаты и обсуждение

Известно, что процессы предраковых изменений и формирования активного и роста опухолей разного типа сопровождается количественными изменениями в экспрессии многих антигенов трансформирующихся клеток, что, в свою очередь, индуцирует вторичные изменения продукции а-АТ к разным опухолеассоциированным антигенам [Belousov et al., 2008; Дамиров и др., 2011]. Поэтому относительное содержание многих а-АТ в сыворотках раковых больных, а также пациентов с предраковыми изменениями разной гистологической картины и разной локализации, как правило, существенно отличается от нормального сывороточного содержания тех же ауто-АТ. На этом феномене основывается способность иммунной системы «видеть» формирующуюся и растущую опухоль. Понятно, что этот же феномен позволяет рассчитывать на возможность создания скриннинговых иммунохимических методов раннего выявления опухолевого процесса, а также позволяет вести мониторинг за эффективностью проведенного лечения и рано выявлять рецидивы болезни (устранены/не устранены и появились/не появились вновь иммунохимические признаки патологии).

Тридцать пять лет назад Husby с коллегами [Husby et al., 1976] было показано, что Т-лимфоциты инфильтрирующие опухоль составляют 72% от всей популяции лимфоцитов в инфильтрате, инфильтрация В-лимфоцитов находилась на уровне 25%. При этом было выявлено большое количество очаговых иммунных комплексов, инфильтрирующих как тканевой матрикс, так и клетки самой опухоли (до 50% случаев). К сожалению, в то время попытки выделить и идентифицировать опухоль-инфильтрирующие а-АТ оказались безуспешными, что на годы предопределило направленность научного поиск онкоиммунологов, ограниченного сферой Т-клеточного ответа. Однако в последнее десятилетие внимание исследователей вновь повернулось к а-АТ, профили которых заметно меняются в условиях опухолевого роста [Дамиров и др., 2011] и анализировать изменения которых существенно проще и дешевле, чем изменения антигенспецифических Т-клеток.

Характеристики профилей иммунореактивности а-АТ у пациенток с ДШМ разных степеней представлена на Рис. 1.

Рис. 1. Профили иммунореактивности пациентов с ДШМ разных степеней до лечения

Обращает внимание, что из 12 анализируемых показателей достоверные различия имелись для а-АТ к sc- Jagged (Sc_Jagged_YCF), Nuclear receptor coactivator 4 (Nrc4_WEF), MAGE-A3 (MAGE-A3_LEY), S100 (S100_KHK), Collagen II (Coll_PST-12). Характерно, что все эти антигены так или иначе оказываются связанными с регуляцией эмбриогенеза. При изучении динамики изменений сывороточных уровней этих а-АТ до лечения и после проведенного лечения было показано, что уровни большинства из изучавшихся антител достоверные отличаются (критерий Вилкоксона, р<0,05). Характерно, что после эффективного лечения уровни а-АТ достоверно повышались и по ряду параметров приближался к уровням, типичным для здоровых лиц (Рис. 2).

Рис. 2. Профили иммунореактивности пациентов с ДШМ разных степеней спустя 6 мес. после лечения

Полученные нами данные по изменениям содержания ряда а-АТ до- и после эффективного лечения ДШМ, позволяют предпологать возможность применения соответствующих иммунохимических методов для дифференциальной диагностики дисплазий, а также уточнения диагноза при наличии стертых промежуточных стадий ДШМ. Подбор адекватных наборов антигенов позволит разработать диагностические тест-системы, с помощью которых можно будет очень рано (на этапах предраковой трансформации и начальных стадиях рака) выявлять изменения в паттернах естественных а-АТ, типичные для неопластических процессов. Последние, уже в ближайшие 3-5 лет могут стать одним из эффективных инструментов массовой диспансеризации населения, направленной на выявление предраковых и собственно онкологических заболеваний на ранних стадиях развития.

Рис. 3. Векторы изменений иммунореактивности
исследовавшихся а-АТ у пациенток с ДШМ (до- и после лечения)


Список литературы

  1. Полетаев А.Б. – Физиологическая иммунология, Москва, Миклош, 2010.
  2. Backes C., Ludwig N., Leidinger P., Harz C., Homann J., Keller A., Meese E., Lenho H-P. – Immunogenicity of autoantigens. BMC Genomics 2011, 12:340 doi:10.1186/1471-2164-12-340.
  3. Poletaev A. B., Maltseva L. I., Zamaleeva R. S., Nukhnin M. A., Osipenko L. G. – Application of ELI-P-Complex Method in Clinical Obstetrics. American Journal of Reproductive Immunology (2007), 57, 294–301.
  4. Lacroix-Desmazes S., Kaveri S.V., Mouthon L., Ayouba A., Malanchere E., Coutinho A., Kazatchkine M.D. – Self-reactive natural autoantibodies in healthy individuals. J. Immunol. Methods, 1998, 216, 117-137.
  5. Poletaev A.B.Churilov L.P. – Immunophysiology, natural autoimmunity and human health. Anosia, 2010, 6, 1, 11-18.
  6. Ковалев И.Е., Полевая О.Ю. – Биохимические основы иммунитета к низкомолекулярным химическим соединениям. М., Наука, 1985.
  7. Полетаев А.Б., Алферова В.В., Абросимова А.А., Комиссарова И.А., Соколов М.А., Гусев Е.И. – Естественные нейротропные аутоантитела и патология нервной системы Ж. Нейроиммунология, 2003, 1, 1, 11-17.
  8. Арапов Н.А., Полетаев А.Б. – О перспективах развития новой концепции профилактической медицины. Главный врач, 2007, № 6, 72-76
  9. Широхова Н.М., Карабиненко А.А., Сторожаков Г.И., Симонова А.В., Cкурыдин С.В. – Роль пульмотропных аутоантител в иммунопатогенезе внебольничной пневмонии у пациентов пожилого и старческого возраста. Росс. Мед. Журн., 2011, 2, 3-7
  10. Belousov P. V., Kuprash D. V., Sazykin A. Yu., Khlgatian S. V., Penkov D. N., Shebzukhov Yu. V., Nedospasov S. A. – Cancer-Associated Antigens and Antigen Arrays in Serological Diagnostics of Malignant Tumors. Biochemistry (Moscow), 2008, Vol. 73, No. 5, 562-572.
  11. Xie C., Kim H. J., Haw J. G., Kalbasi A., Gardner B.K., Li G., Rao J., Chia D., Liong M., Punzalan R.R., Marks L.S., Pantuck A.J., de la Taille A., Wang G., Mukouyama H., Zeng G. – A novel multiplex assay combining autoantibodies plus PSA has potential implications for classification of prostate cancer from non-malignant Cases. J. Translational Medicine, 2011, 9:43 doi:10.1186/1479-5876-9-43.
  12. Киселев Ф.Л., авлиш O.A., Татосян О.Г. – Молекулярные основы канцерогенеза у человека. М.: Медицина, 1990.
  13. Черезов А.Е. – Общая теория рака. Тканевой подход. Изд-во Московского Ун-та. 1997.
  14. Poletaev A. B., Stepanyuk V. L., Gershwin M. E. – Integrating immunity: The immunculus and self-reactivity, 2008, 30, 1-2, 68-73.
  15. Meroni P.L., De Angelis V., Tedesco F. – Future Trends. In: Autoantibodies, (Y. Shoenfeld, M. E. Gershwin, P. L. Meroni. Eds.), 823-826, 2007, Elsevier, B.V.
  16. Дамиров М.М., Тютерева И.Н., Ганцев Ш.Х., Полетаева А.А., Полетаев А.Б., Юсупов А.С. – Аутоиммунитет и рак. Новые подходы к ранней диагностике злокачественного роста. Креативная хирургия и онкология, 2011, 3, 89-93
  17. Husby, G., P. M. Hoagland, et al. Tissue T and B cell infiltration of primary and metastatic cancer. J Clin Invest, 1976, 57, 1471-1482.


Ваше мнение о представленной работе (выберите наиболее подходящую оценку):


1 балл - Констатация известных фактов
2 балла - Решение частной научной задачи, имеющее ограниченную область применения
3 балла - Исследования, внедрение результатов которых вносят
&nbsp&nbsp&nbsp&nbsp&nbsp&nbsp&nbsp&nbsp&nbsp&nbsp&nbsp&nbsp&nbsp&nbsp&nbspзначительный вклад в онкологию и/или хирургию
4 балла - Решение крупной научной проблемы
5 баллов - Инновационное исследование мирового уровня

Loading ... Loading ...

Смотрите также:

  • Смертность от злокачественных новообразований населения Республики Башкортостан и города Уфы за 2001–2010 годы
    Л.Н. Кудряшова, Л.Р. Назмиева, Д.М. Габитова Кафедра хирургии и онкологии с курсами онкологии и патологической анатомии ИПО, Башкирский государственный медицинский университет, Республиканский ...
  • Эпидемиологическая ситуация по заболеваемости раком легких на территориях Республики Башкортостан с различными уровнями антропогенной нагрузки на атмосферный воздух
    Э.В.Кириллова2, Г.Е. Ефимов, В.Н. Ручкин2, Т.В. Кайданек, Г.М. Шайхиева, Е.В. Сенькина, В.М. Ахметов Башкирский государственный медицинский университет, Республиканский клинический онкологический ...
  • Медико-статистические показатели – основа планирования онкологической помощи населению
    Л.Н. Кудряшова Кафедра хирургии и онкологии с курсами онкологии и патологической анатомии ИПО, Башкирский государственный медицинский университет, Республиканский клинический онкологический дисп...

Пожалуйста, зарегистрируйтесь для комментирования.

Просмотров: 70 | Добавил: thehas | Рейтинг: 0.0/0
Всего комментариев: 0
Поиск

Календарь
«  Июнь 2013  »
ПнВтСрЧтПтСбВс
     12
3456789
10111213141516
17181920212223
24252627282930

Архив записей

Друзья сайта
  • Официальный блог
  • Сообщество uCoz
  • FAQ по системе
  • Инструкции для uCoz


  • Copyright MyCorp © 2016   Бесплатный конструктор сайтов - uCoz